略知皮毛而已什么意思,略知皮毛是成语吗

tamoadmin 成语分类 2024-07-01 0
  1. 下载什么样的歌曲音质最好
  2. 企业内部竞聘面试问题
  3. 关于克隆的资料以及奥运会的资料,要速度!!!!!!!

通过暑期两个月在Xx馆的实习,收获颇多,已能较为熟练的使用饮食通软件,财务软件,能编制基本的凭证,登帐,科目汇总,以及损益表,毛利表,费用表,收支表的制作,以下做出总结,谈谈此次社会实践的心得以及经历。

一、编制凭证

由于实习单位是餐饮类,因此业务没有一些大企业的那么繁琐,对于凭证,财务通常是全部使用“记账凭证”,在右上角注明“现收”“现付”“银收”“银付”,就不用像大企业一样用不同的凭证了,一般大企业里会使用“收款凭证”“付款凭证”“转账凭证”。而关于凭账的编制方面,由于我们的理论知识基本上是工业会计,所以在科目上***不同。比如收取了客人的订金,是 借:现金 贷:其他应付款。而且在发放工资上也没有工业会计那么复杂,工业会计要计件或者计时来算员工的工资,比较复杂,而这是的工资发放主要依据员工的出勤率来算的,正式员工每个月有四天***,放***不扣工资,一个月除开休***出勤满的话,有出勤奖30元,如果是住在员工宿舍的话,每个月还要扣水电费,凭证如下:借:应付职工薪酬 管理费用 (租金水电、社保 红字冲减)营业费用(冲减扣款)其他应付款(退员工培训费)贷:现金。

略知皮毛而已什么意思,略知皮毛是成语吗
(图片来源网络,侵删)

二、登账

其实第一次接触账本时,我有点傻眼。因为账本很大,很重,最主要的是很多,一共是六本,进销存明细账(也就是库存物资),销售明细账(也就是主营业收入),应收应付三栏明细账,资产负债三栏明细账,费用十七栏借贷明细账,总分类账。这里边比较简单的就是进销明细账,销售明细账,因为进销明细账只是记录购进的物资,销售明细账主要是记录主营业务收入,而由于餐饮类有业务不多就是重复,因此可以依据公司的具体情况来选择记账,本公司是按星期记账,也就是说7-9天的一起做,这样也大大减少了工作量,而且简单明了。而应收应付三栏账,它分两个部分,前面的一半是应收,后面的全是应付,应收应付再分不同的供应商,应收的话主要就是针对挂账的公司或客户,凡是挂账的通通都要有签单合同以及单位负责人的签名,公司的公章等等,一般的私人就***用临时挂账,但须本公司经理以上的人担保:应付的分类是按供应商来分的,比如广州市百福,莫海彬蔬菜,利丰厨具等等……资产负债就要复杂一点,它里面还要分很多,具体有现金,银行存款,其他应收款,营业外支出,营业外收入,待摊费用,固定资产,累计折旧,长期待摊费,短期借款,应付工资,应付***,应交税金,其他应付款,预提费用,实收资本,本年利润,未分配利润等。费用明细账就是财务费用,管理费用,以及营业费用。

登账过程中如果出了错只要划掉重写就可以了,文字错了用笔划去,数字错了就用红笔划去再用黑笔写上就成,从“现收”开始,每一张凭证都要编号,一般顺序是“现收”“银收”“银付”“现付”,这个没有明文规定,怎么方便就用哪种,一个月的登入完毕后就要本月合计,累计,有的还要结转,比如费用,收入。账本在登账时一定要盖好章,行一盖上上年结转,行末盖上过次页,然后再是承前页,月末再合计,累计就可以了,结转的数用红笔写。

三、汇总、试算平衡

其实这步应在登账之前,因为这步容易发现错误,把所有的凭证全部拿来科目汇总,用T字账来表示,现金,银行存款等一个个分好类,与此同时还要做电脑账,电脑上须建立几个表,例如,收支表,费用表,毛利表,收支表主要分左边的现金收入,支出,右边的银行收入,支出。费用表就是管理费用,营业费用,和财务费用,一般营业费用单独做,而管理费用和财务费用可以做在一张表上,因为通常营业费用比较多。财务费用的明细就是POS机手续费,利息,以及银行手续费,POS手续费一般就是客户通过刷卡消费扣的手续费,银行手续费就是给供应商汇款等其他的手续费,利息一般有应收利息和存款利息,应收利息是公司借款给其他公司或个人,还就是投资定期应收的利息,这两种就用"应收利息"。存款利息是冲抵财务费用科目的,是公司的款项在银行产生的利息另外,如要每月计提存款利息,分录为:借:应收利息 贷:财务费用 但一般不是定期存款的话不会做上面的分录,而是在收到银行利息时做账: 借:银行存款 贷:财务费用。管理费用的话,购,就是管理费用——办公费,每个月扣员工的租金水电就是冲减速管理费用的宿舍租金水电用红字冲减,以及一些招待费,电话费等。营业费用就广得多了,水电费,燃气费,油费,行车路桥费,广告费,员工保安费,洗涤费,折扣抹零,绿化费,待摊费,提成等等。如待摊费用每个月都要摊销,借:营业费用——待摊费 贷:待摊费用 发提成就是 借:营业费用——提成 贷:现金

做好科目汇总后就编一个试算平衡表,接着就是对账,账要上的账要和电脑上的,以及科目汇总的一致

四、编制报表

每个月的忙活其实都是为了这几张表,资产负债表,损益表,毛利表,费用表等。这些表的制作要注意格式方面的细小问题,以及电脑记账时一定要细心细心再细心。

五、体会

我最深的体会,就是感谢,不说别的感谢,就感谢我那会上课好好听讲,学到了点基本知识,也好来学习,为整个实习奠定了基础。尽管这个基础不是那么的牢靠,我还要感谢我的电脑老师,教会我用excel,Word,实习中我发现excel最重要!!好多东西都要用到它……而在运用excel制作那些时表需要的不仅是耐心,还有足够的脑力和体力。跟着会计阿姨以及出纳阿姨学习的过程中,知不足,然后更加用心的学习,弥补错误,改过重来。慢慢的我知道了整个流程,不能说是全部,只是略知皮毛而已,我还需要付出更多,让所有人都看到我的努力,我尽可能的做好自己应该做的事情,不懂得就向阿姨们请教,多问,她们就像老师一样,看着我一步步,一点点的蜕变以及成长。会计阿姨是特别有经验的老会计,懂得很多东西,她也教了我许多在大学里没有学过的,会计阿姨很努力,每天都很忙,要做这,做那,有的不是自己的分内事也完成了,而且还完成的特别好。我在这里遇到的最棘手的,莫过于将理论转化成实践,很多东西在理论上是成立的,但是真正操作起来却如此不同,难以理解。还有理论知识,由于要考会计证都是做题,看书,所以很多知识并没有真正的理解,比如什么月末转收入,转费用,转利润,我以前只在试卷上看过,用最基本的方法算过,可是真正在实践中遇到了我发现自己把什么都还给了老师,比如应收,应付,预收,预付,我真的头都大了一圈,我现在还没办法去理解这些东西,还有什么应付账款,其他应付款。还有营业费用,管理费用的明细,分的太多,我都混淆了好多,还有冲销,调账,很多都是只是在书本上见过这个词而已,真正要冲销,调账,我整个就傻眼了。什么预提费用,还有就是那些关于资金类的什么长期股权投资,债权之类的我压根不会。看来我今年返校的目标相当的简单,就是把大一的会计基础知识,大二的成本会计等等全部拿出来再看一遍……温故而知新吧!在实习的过程中我也会犯很多错,会出好多问题,但是,我是第一次接触会计,第一次知道会计,我以前就以为会计是数钱的,其实不然,真正的了解了,亲身体会了我才明白会计不容易,开始尊重,爱戴,喜欢这个职业……明年就要开始找工作了,这次实习,更让我懂得了珍惜现在的生活,校园生活真的非常完美,非常令人羡慕!Xx的竞争很大,“逆水行舟,不进则退”,必须时刻提醒自己,督促自己!同时也看到了许多,知道做人比做事更加重要,没有人天生就会,没有人天生就懂,只有不断地努力才能成功,在这里不是每个人都有认为你是什么的,有的人就觉得你什么也不是。你只有付出好好学,做给她们看。证明自己不是虚的,证明自己有实力,名副其实!

下载什么样的歌曲音质最好

1.促使学生使用高级有序思维能力的程度

若要求学生接受或背诵事实性信息、或者回答要求再现知识的问题、或者通过重复的程序去应用某种规则和算法。那么这种教学体现的思维水平就是低级思维。而若要求学生转化信息和观点的含义,如学生为了综合、概括、解释、***设或得出某种结论和解释而组合某种事实和观点时,这种教学体现的思维水平就是高级思维。通过这些过程来操纵信息和观点。有助于学生解决问题、发现对自己而言的新意义和理解。而学生投入高级思维之中时,就会有不确定的因素,教学结果由此并不总是可以预测的。

2.教学所涉及的知识的深度

“知识的深度”意指抓住了观点的实质特征、以及学生在考虑这些观点时所展示的理解水平。若教学没有涉及到主题或学科的重要概念,所涉及的知识就非常浅显。如果学生对重要概念的理解支离破碎,或者对概念的意义仅仅略知皮毛,所学到的知识也是很浅显的。肤浅的原因之一是教师的教学注重的是大量支离破碎的信息。若教学关心的是主题或学科的核心概念,那么所涉及的知识就比较深。如。当学生进行鉴别、论证、提出问题解决的方案、构建解释或其他相对复杂的理解性活动时,他们所从事的知识就比较深入。若要做到这一点。教师就要组织学生系统地、有联系地研究某些主题,而不要贪求过多的主题。

3.与课堂外世界的联系程度

这一指标测量的是课堂教学在教学语境之外所体现的价值和意义。取得学校考试中的成功,仅仅证明学生很好地顺应了正式的学校教育标准,但不能说明这种成功对别人有多大意义。而教学的真实性越强,就会与学生生活的社会背景有更深的联系。可以从两个方面考察教学与外界的联系程度:一是教学是否要求学生着眼于解决某种公共问题,如利用关于无家可归者材料中的统计分析,澄清某一当代问题:二是能否促使学生实际地运用某种知识和经验,如在学校里使用解决冲突的技巧。总之,与外界联系密切的教学注重学生对课堂外受众的影响,如与他人交流知识、探索社会问题的解决办法、给予别人以支持、创造出有使用价值或审美价值的结果或产品。

4.进行高水平的实质性对话的程度

在没有或缺乏实质性对话的课堂里,师生之间的相互作用变成了教师详述式的讲演。或传递事前规划好了的信息和问题,而学生只是惯例性地简单回答一下。这样的对话与填空、简答等形式无异,只是填空、简答是书面回答,而对话是口头形式而已。而高水平的实质性对话具备三种特征:一是对论题进行了充分的交流。交流的过程中需要进行鉴别、运用概念、加以概括、提出问题,而不仅仅是汇报自己的经验、事实或步骤;二是交流的过程不是一种观点、答案受到控制的过程,而是共享思想观点的过程。如参与者以完整的句子解释自己的观点、直接对他人的评论作出反应;三是对话是连贯的,以参与者的思想观点为基础,以促进集体的理解。

5.对学生成就的社会性支持程度

若教师或某些学生的行为、评论及行动打击了学生努力的程度、参与的热情与表达自己观点的意愿:或者之前的某种消极行为使得课堂的总体气氛比较消极。这些都是没有给予学生的真实性成就以支持的表现。甚至教师对学生的行动或反应所作出的象征***谢与表扬都不一定是社会性支持的表现。而高程度的社会性支持意味着教师对所有的学生都提出了较高的期望、鼓励他们“表达”自己的观点而不是“表现”正确的答案给老师和同伴观赏、促使班级里所有的学生学习重要的知识和技能、班级里所有成员之间相互尊重、同等重视那些能力较差或学业成绩不好的学生的表现。[

企业内部竞聘面试问题

1、音乐格式——将音源信号按照不同的协议进行录制和压缩进行处理后,形成的档案文件格式。音乐格式分无损压缩格式(如CD、WAVE等格式)、有损压缩格式(如MP3、RM、WMA)和一些专用格式(如MIDI)。 本文主要是对音频格式分析。

2、位速——每秒钟声音流的字节数,也叫码率、码速、线速等。单位是Kbps或Kb/s,注意这里使用的"b"是bit。通常人们“位速”又叫音效水平,一般位速高代表音效水平较好。

3、档案容量——是指存储在记录器(如磁盘、光盘等)上的占用空间容量。一般用*MB表示,本文使用的"B"是byt单位; 1byt=8bit。

4、声音文件——是音乐、歌曲、朗诵等文件的总称。为行文直观,本文也用音乐、歌曲的来泛代声音文件。

二.首先我们来认识下MP3这种现下最流行的音频格式:

MP3 是利用 MPEG Audio Layer 3 的技术,将声音用 1:10 甚至 1:12 的压缩率,变成容量较小的文件,但是在人耳听起来,却没有什么不同。当然这是一种失真压缩,就像图形文件 JPG 一样,因为失真压缩,所以可以压得很多,也可以调整压缩比率,压得越多失真也越多。

现在最流行的几款MP3编码方式:

VBR(Variable Bitrate)动态比特率。也就是没有固定的比特率,压缩软件在压缩时根据音频数据即时确定使用什么比特率,这是以质量为前提兼顾文件大小的方式,推荐编码模式;

ABR(Average Bitrate)平均比特率,是VBR的一种插值参数。LAME针对CBR不佳的文件体积比和VBR生成文件大小不定的特点独创了这种编码模式。ABR在指定的文件大小内,以每50帧(30帧约1秒)为一段,低频和不敏感频率使用相对低的流量,高频和大动态表现时使用高流量,可以做为VBR和CBR的一种折衷选择。

CBR(Constant Bitrate),常数比特率,指文件从头到尾都是一种位速率。相对于VBR和ABR来讲,它压缩出来的文件体积很大,而且音质相对于VBR和ABR不会有明显的提高。

MPC: (MusePaCk) 音乐格式新宠儿MPC,在全方面音频测试中MPC是所有编码中最好的.为了保证高音质,它的最大码率甚至高达1.32Mbps,这已经快接近CD的1.41Mbps了!不过由于知名度较前面的低,直接就能播放MPC的软件非常少,据我们所知只有FooBar2000和JetAudio 5.

三.由于大家对mp3这种格式大多都是略知皮毛,现对MP3及音频压缩技术的一些误解进行解答

1、mp3的音质很差?

错。mp3作为当前音频有损压缩的“王者”,它的编码技术已经几近完美。很多人只是不清楚如何才能压缩出高品质的mp3而已。2001年12月,世界上最优秀的mp3编码器--LAME推出了革命性的版本3.90.2,针对lame压缩参数过于烦琐的情况,提供了几个preset(预设)参数。现在只要使用LAME的standard(标准)模式进行压缩,就能得到近似于CD的完美音质。

2、128kbps的mp3=CD音质?

错。首先,所谓CD音质是一个带有很大主观性的名词,基本上可以认为CD音质意味着在平均水平的听音条件下能达到用光驱放CD的效果。但是根据这个定义,无数的试听结果表明,不管用什么编码器,什么样的设置,128kbps的mp3都不能达到这个标准。关于这方面的主题可参考这是一个非常著名的国外音频站点,对128kbps的mp3的测试有非常详细的理论阐述。

3、mp3 192kbps CBR(固定比特速率) stereo(立体声)编码是音质与文件大小的最佳平衡设置?

错。这一误解有很深的根源。因为128kbps的mp3在音质上不能被“苛刻”的音乐爱好者接受,所以他们要寻求更好的设置。对Xing编码器及Fraunhofer编码器来说,直到现在它们在VBR(可变比特速率)和jointstereo(混合立体声)的算法上都很失败,所以很多人都认为CBR和stereo才是最佳的选择,而且192kbps的mp3在文件大小上也是可以接受的。是LAME编码器改变了这一切!LAME***用的VBR及智能的joint stereo算法非常优秀,已经没什么理由再去使用CBR和stereo--这样做只会浪费有限的bits。标准的VBR预定设置(即使用--alt-preset standard参数)生成的mp3文件的平均比特率也是192kbps,但它的音质要好过CBR 192kbps,在同等的比特率下其他的编码器非其敌手(按:除了1、mpc--其音质在该bitrate左右好于mp3, 2、最近的oggenc 1.0--not tested yet)。

4、mp3 320kbps CBR Stereo是mp3音质的极限?

错(或者说Not exactly true)。虽然320kbps是mp3标准的极限,但在320kbps下使用设计良好的Joint Stereo,能够将节省下下的bits用于纯粹的音乐部分(从而提高音质)。如果音源的立体声分离度很低,使用完全的stereo是一种浪费。

5、VBR的音质不如CBR?

错。设计良好的VBR算法不会将bits浪费在易于编码的部分,节省下来的bits将用在对复杂的音频部分进行编码。这一误解可能来自于较老的FhG Encoder的VBR算法及Xing VBR算法中存在的bug,对当前的lame编码器来说,它的VBR算法已被协调得很好,不会有音质上的问题。

最高品质参数:

--alt-preset insane或者--alt-preset cbr 320

320k CBR,音质最好,文件体积最大

VBR参数:

1.--alt-preset extreme

220-270k左右的VBR,音质与上面参数相仿,但文件体积小25%,推荐此参数

2.--alt-preset fast extreme

音质比上面参数稍微差一些

3.--alt-preset standard

180-220k左右的VBR,在音质和文件大小之间比较好的平衡

4.--alt-preset fast standard

音质比上面参数稍微差一些

5.--alt-preset standard -Y

虽然品质稍差,但文件体积非常小

ABR参数:

--alt-preset <Bitrate>

(可用Bitrate:80、96、112、128、160、192、224、256、320)

CBR参数:

--alt-preset cbr <Bitrate>

(可用Bitrate:80、96、112、128、160、192、224、256、320)

关于克隆的资料以及奥运会的资料,要速度!!!!!!!

企业内部竞聘面试问题

 因工作需要,内部竞聘策略在公司内开始施行。

 岗位及人员就不介绍了,单讲下竞聘面试题目。面试题目开始时并未定稿,因为是第一次,拿不准,故***取跟踪应聘者反应节奏的方式来面试,但心理测试环节内容还是定了:陷阱。

 竞聘面试过程中,最让人想不到的有员工来竞聘,却不清楚竞聘岗位的具体工作要求,而我们在内部竞聘通知下达时,岗位要求是非常明确标注的,所以部分竞聘人员第一轮即被确认:不适合本岗位。不打无准备之仗,我们讲了多少年了,却没人认真听过。

 对进入第二轮竞聘者,我们重点关注了情商了,设置陷阱,是最能体现情商的方式,所以我们也乐此不疲(说白了,其他的我们也不懂,这个也只是略知皮毛而已,更多的是现学现卖)。

 但我们也为了更全面了解竞聘者,还是给了些常规题目:

 1、如尽量多地写出个人适合本岗位的优势(考查对自己优势的`评估,是否自信)

 2、现在工作中的困难是什么?准备如何解决(考查是否有大局观,也可看出来竞聘理由)

 3、上行管理与下行管理要注意什么?(可考查执行力与个人管理方式)

 4、如果在新岗位上得不到主管认可,怎么办?(面对挫折)

 这些题目,没有标准答案,并且写的好不一定做的好,也就是写时可以较长时间考虑,而实际工作中是没有时间考虑的,所以以上题目是考查“想法”,而不是“做法”。陷阱题目则是现场考查“做法”的题目,如果更能体现出“想法”,那则是合适人选了。

 A、请谈谈您个人的职业规划。这个题目的陷阱在哪里就不说了,否则根据我现在的能力,以后就没题目考查别人了,^_^。

 B、性格与成功有多大的关系?^_^,这个题目也是陷阱,考察的是情商内容,具体也就不讲了。

 七个竞聘者最后没有真正合适者,但为了以后能让大家都愿意参加内部竞聘,以形成公司人才内部流动,最大化留住人才,增强员工凝聚力,对部分竞聘者***取换岗方式,除增加了工资外,也让他们知道在公司里还有很多岗位他们可以去尝试。

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关于克隆的资料

克隆是英文clone的音译,简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。但克隆与无性繁殖是不同的。无性繁殖是指不经过雌雄***生殖细胞的结合、只由一个生物体产生后代的生殖方式,常见的有孢子生殖、出芽生殖和分裂生殖。由植物的根、茎、叶等经过压条或嫁接等方式产生新个体也叫无性繁殖。绵羊、猴子和牛等动物没有人工操作是不能进行无性繁殖的。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆,这门生物技术叫克隆技术。

克隆的基本过程是先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中,利用微电流***等使两者融合为一体,然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎,当胚胎发育到一定程度后,再被植入动物***中使动物怀孕,便可产下与提供细胞者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造,那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相同的变化。

克隆技术不需要雌雄交配,不需要***和卵子的结合,只需从动物身上提取一个单细胞,用人工的方法将其培养成胚胎,再将胚胎植入雌性动物体内,就可孕育出新的个体。这种以单细胞培养出来的克隆动物,具有与单细胞供体完全相同的特征,是单细胞供体的“***品”。英国英格兰科学家和美国俄勒冈科学家先后培养出了“克隆羊”和“克隆猴”。克隆技术的成功,被人们称为“历史性的***,科学的创举”。有人甚至认为,克隆技术可以同当年的问世相提并论。

克隆技术可以用来生产“克隆人”,可以用来“***”人,因而引起了全世界的广泛关注。对人类来说,克隆技术是悲是喜,是祸是福?唯物辩证法认为,世界上的任何事物都是矛盾的统一体,都是一分为二的。克隆技术也是这样。如果克隆技术被用于“***”像之类的战争狂人,那会给人类社会带来什么呢?即使是用于“***”普通的人,也会带来一系列的***道德问题。如果把克隆技术应用于畜牧业生产,将会使优良牲畜品种的培育与繁殖发生根本性的变革。若将克隆技术用于基因治疗的研究,就极有可能攻克那些危及人类生命健康的癌症、艾滋病等顽疾。克隆技术犹如原子能技术,是一把双刃剑,剑柄掌握在人类手中。人类应该***取联合行动,避免“克隆人”的出现,使克隆技术造福于人类社会。

克隆技术研究现状

一、克隆的早期研究

克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆内所有成员的遗传构成是完全相同的,例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实际上就是一种克隆。然而,天然的哺乳动物克隆的发生率极低,成员数目太少(一般为两个),且缺乏目的性,所以很少能够被用来为人类造福,因此,人们开始探索用人工的方法来生产高等动物克隆。这样,克隆一词就开始被用作动词,指人工培育克隆动物这一动作。

目前,生产哺乳动物克隆的方法主要有胚胎分割和细胞核移植两种。克隆羊“多莉”,以及其后各国科学家培育的各种克隆动物,***用的都是细胞核移植技术。所谓细胞核移植,是指将不同发育时期的胚胎或成体动物的细胞核,经显微手术和细胞融合方法移植到去核卵母细胞中,重新组成胚胎并使之发育成熟的过程。与胚胎分割技术不同,细胞核移植技术,特别是细胞核连续移植技术可以产生无限个遗传相同的个体。由于细胞核移植是产生克隆动物的有效方法,故人们往往把它称为动物克隆技术。

***用细胞核移植技术克隆动物的设想,最初由汉斯·施佩曼在1938年提出,他称之为“奇异的实验”,即从发育到后期的胚胎(成熟或未成熟的胚胎均可)中取出细胞核,将其移植到一个卵子中。这一设想是现在克隆动物的基本途径。

从1952年起,科学家们首先***用青蛙开展细胞核移植克隆实验,先后获得了蝌蚪和成体蛙。1963年,我国童第周教授领导的科研组,首先以金鱼等为材料,研究了鱼类胚胎细胞核移植技术,获得成功。

哺乳动物胚胎细胞核移植研究的最初成果在1981年取得——卡尔·伊尔门泽和彼得·霍佩用鼠胚胎细胞培育出发育正常的小鼠。年,施特恩·维拉德森用取自羊的未成熟胚胎细胞克隆出一只活产羊,其他人后来利用牛、猪、山羊、兔和猕猴等各种动物对他***用的实验方法进行了重复实验。1989年,维拉德森获得连续移核二代的克隆牛。1994年,尼尔·菲尔斯特用发育到至少有120个细胞的晚期胚胎克隆牛。到1995年,在主要的哺乳动物中,胚胎细胞核移植都获得成功,包括冷冻和体外生产的胚胎;对胚胎干细胞或成体干细胞的核移植实验,也都做了尝试。但到1995年为止,成体动物已分化细胞核移植一直未能取得成功。

二、克隆羊“多莉”的意义和引起的反响

以上事实说明,在19***年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前,胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展。实际上,“多莉”的克隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程,但这并不能减低“多莉”的重大意义,因为它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物,是克隆技术领域研究的巨大突破。这一巨大进展意味着:在理论上证明了,同植物细胞一样,分化了的动物细胞核也具有全能性,在分化过程中细胞核中的遗传物质没有不可逆变化;在实践上证明了,利用体细胞进行动物克隆的技术是可行的,将有无数相同的细胞可用来作为供体进行核移植,并且在与卵细胞相融合前可对这些供体细胞进行一系列复杂的遗传操作,从而为大规模***动物优良品种和生产转基因动物提供了有效方法。

在理论上,利用同样方法,人可以***“克隆人”,这意味着以往科幻***中的独裁狂人克隆自己的想法是完全可以实现的。因此,“多莉”的诞生在世界各国科学界、政界乃至宗教界都引起了强烈反响,并引发了一场由克隆人所衍生的道德问题的讨论。各国***有关人士、民间纷纷作出反应:克隆人类有悖于***道德。尽管如此,克隆技术的巨大理论意义和实用价值促使科学家们加快了研究的步伐,从而使动物克隆技术的研究与开发进入一个***。

三、近3年来克隆研究的重要成果

克隆羊“多莉”的诞生在全世界掀起了克隆研究热潮,随后,有关克隆动物的报道接连不断。19***年3月,即“多莉”诞生后1个月,美国、***和澳大利亚科学家分别发表了他们成功克隆猴子、猪和牛的消息。不过,他们都是***用胚胎细胞进行克隆,其意义不能与“多莉”相比。同年7月,罗斯林研究所和PPL公司宣布用基因改造过的胎儿成纤维细胞克隆出世界上第一头带有人类基因的转基因绵羊“波莉”(Polly)。这一成果显示了克隆技术在培育转基因动物方面的巨大应用价值。

1998年7月,美国夏威夷大学Wakayama等报道,由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠,其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代,这是继“多莉”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。此外,Wakayama等人***用了与“多莉”不同的、新的、相对简单的且成功率较高的克隆技术,这一技术以该大学所在地而命名为“檀香山技术”。

此后,美国、法国、荷兰和韩国等国科学家也相继报道了体细胞克隆牛成功的消息;日本科学家的研究热情尤为惊人,1998年7月至1999年4月,东京农业大学、近畿大学、家畜改良事业团、地方(石川县、大分县和鹿儿岛县等)家畜试验场以及民间企业(如日本最大的奶商品公司雪印乳业等)纷纷报道了,他们***用牛耳部、臀部肌肉、卵丘细胞以及初乳中提取的乳腺细胞克隆牛的成果。至1999年底,全世界已有6种类型细胞——胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管/***上皮细胞、肌肉细胞和耳部皮肤细胞的体细胞克隆后代成功诞生。

2000年6月,中国西北农林科技大学利用成年山羊体细胞克隆出两只“克隆羊”,但其中一只因呼吸系统发育不良而早夭。据介绍,所***用的克隆技术为该研究组自己研究所得,与克隆“多莉”的技术完全不同,这表明我国科学家也掌握了体细胞克隆的尖端技术。

在不同种间进行细胞核移植实验也取得了一些可喜成果,1998年1月,美国威斯康星一麦迪逊大学的科学家们以牛的卵子为受体,成功克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎,这一研究结果表明,某个物种的未受精卵可以同取自多种动物的成熟细胞核相结合。虽然这些胚胎都流产了,但它对异种克隆的可能性作了有益的尝试。1999年,美国科学家用牛卵子克隆出珍稀动物盘羊的胚胎;我国科学家也用兔卵子克隆了大熊猫的早期胚胎,这些成果说明克隆技术有可能成为保护和拯救濒危动物的一条新途径。

四、克隆技术的应用前景

克隆技术已展示出广阔的应用前景,概括起来大致有以下四个方面:(1)培育优良畜种和生产实验动物;(2)生产转基因动物;(3)生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法;(4)***濒危的动物物种,保存和传播动物物种***。以下就生产转基因动物和胚胎干细胞作简要说明。

转基因动物研究是动物生物工程领域中最诱人和最有发展前景的课题之一,转基因动物可作为医用器官移植的供体、作为生物反应器,以及用于家畜遗传改良、创建疾病实验模型等。但目前转基因动物的实际应用并不多,除单一基因修饰的转基因小鼠医学模型较早得到应用外,转基因动物乳腺生物反应器生产药物蛋白的研究时间较长,已进行了10多年,但目前在全世界范围内仅有2例药品进入3期临床试验,5~6个药品进入2期临床试验;而其农艺性状发生改良、可资畜牧生产应用的转基因家畜品系至今没有诞生。转基因动物制作效率低、定点整合困难所导致的成本过高和调控失灵,以及转基因动物有性繁殖后代遗传性状出现分离、难以保持始祖的优良胜状,是制约当今转基因动物实用化进程的主要原因。

体细胞克隆的成功为转基因动物生产掀起一场新的革命,动物体细胞克隆技术为迅速放大转基因动物所产生的种质创新效果提供了技术可能。***用简便的体细胞转染技术实施目标基因的转移,可以避免家畜生殖细胞来源困难和低效率。同时,***用转基因体细胞系,可以在实验室条件下进行转基因整合预检和性别预选。在核移植前,先把目的外源基因和标记基因(如LagZ基因和新霉素抗生基因)的融合基因导入培养的体细胞中,再通过标记基因的表现来筛选转基因阳性细胞及其克隆,然后把此阳性细胞的核移植到去核卵母细胞中,最后生产出的动物在理论上应是100%的阳性转基因动物。***用此法,Schnieke等(Bio Report,19***)已成功获得6只转基因绵羊,其中3只带有人凝血因子IX基因和标记基因(新霉素抗性基因),3只带有标记基因,目的外源基因整合率高达50%。Cibelli(Science,19***)同样利用核移植法获得3头转基因牛,证实了该法的有效性。由此可以看出,当今动物克隆技术最重要的应用方向之一,就是高附加值转基因克隆动物的研究开发。

胚胎干细胞(ES)是具有形成所有成年细胞类型潜力的全能干细胞。科学家们一直试图诱导各种干细胞定向分化为特定的组织类型,来替代那些受损的体内组织,比如把产生胰岛素的细胞植入糖尿病患者体内。科学家们已经能够使猪ES细胞转变为跳动的心肌细胞,使人ES细胞生成神经细胞和间充质细胞和使小鼠ES细胞分化为内胚层细胞。这些结果为细胞和组织替代疗法开辟了道路。目前,科学家已成功分离到人ES细胞(Thomson等1998,Science),而体细胞克隆技术为生产患者自身的ES细胞提供了可能。把患者体细胞移植到去核卵母细胞中形成重组胚,把重组胚体外培养到囊胚,然后从囊胚内分离出ES细胞,获得的ES细胞使之定向分化为所需的特定细胞类型(如神经细胞,肌肉细胞和血细胞),用于替代疗法。这种核移植法的最终目的是用于干细胞治疗,而非得到克隆个体,科学家们称之为“治疗克隆”。

克隆技术在基础研究中的应用也是很有意义的,它为研究配子和胚胎发生,细胞和组织分化,基因表达调控,核质互作等机理提供了工具。

五、克隆技术存在的问题

尽管克隆技术有着广泛的应用前景,但离产业化尚有很大距离。因为作为一个新兴的研究领域,克隆技术在理论和技术上都还很不成熟,在理论上,分化的体细胞克隆对遗传物质重编(细胞核内所有或大部分基因关闭,细胞重新恢复全能性的过程)的机理还不清楚;克隆动物是否会记住供体细胞的年龄,克隆动物的连续后代是否会累积突变基因,以及在克隆过程中胞质线粒体所起的遗传作用等问题还没有解决。

在实践中,克隆动物的成功率还很低,维尔穆特研究组在培育“多莉“的实验中,融合了277枚移植核的卵细胞,仅获得了“多莉”这一只成活羔羊,成功率只有0.36%,同时进行的胎儿成纤维细胞和胚胎细胞的克隆实验的成功率也分别只有1.7%和1.1%,即使是使用“檀香山”技术,以分化程度较低的卵丘细胞为核供体,其成功率也只有百分之几。

此外,生出的部分个体表现出生理或免疫缺限。以克隆牛为例,日本、法国等国培育的许多克隆牛在降生后两个月内死去;到2000年2月,日本全国已共有121头体细胞克隆牛诞生,但存活的只有头。观察结果表明,部分犊牛胎盘功能不完善,其血液中含氧量及生长因子的浓度都低于正常水平;有些牛犊的胸腺、脾和淋巴腺未得到正常发育;克隆动物胎儿普遍存在比一般动物发育快的倾向,这些都可能是死亡的原因。

即使是正常发育的“多莉”,也被发现有早衰迹象。染色体的未端被称为端粒,它决定着细胞能够分裂的次数:每一次分裂端粒都会缩短,而当端粒耗尽后细胞就失去了分裂能力。1998年,科学家发现“多莉”的细胞端粒比正常的要短,即其细胞处于更衰老的状态。当时认为,这可能是用成年绵羊的细胞克隆“多莉”造成的,使其细胞具有成年细胞的印记,但这一解释目前受到了挑战,美国马萨诸塞州的医生罗伯特·兰扎等用培养的衰老细胞克隆牛,得到6头小牛,出生5~10个月后发现这些克隆牛的端粒比普通同龄小牛要长,有的甚至比普通新生小牛的端粒还长。现在还不清楚这一现象的原因,也不清楚为何与“多莉“的情况有巨大差别。但这一实验说明,在一些情况下克隆过程能改变成熟细胞的分子钟,使其“恢复青春”,关于这种变化对克隆动物寿命的影响,还有待于进一步观察。

除了以上的理论和技术障碍外,克隆技术(尤其是在人胚胎方面的应用)对***道德的冲击和公众对此的强烈反应也限制了克隆技术的应用。但几年来克隆技术的发展表明,世界各科技大国都不甘落后,谁也没有放弃克隆技术研究。这一点上英国***的态度非常具有代表性,在19***年2月底宣布中止对“多莉”研究小组投资后不到1个月,英国科技委员会就对克隆技术发表专题报告,表明英国***将重新考虑这一决定,认为盲目禁止这方面的研究并不是明智之举,关键在于建立一定的规范利用它为人类造福。